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人类遗传物质质粒文库建立技术规程
编辑：
admin
时间：
2007-6-8
来源：中国人类遗传资源平台
人类基因组计划的完成，在人类揭示生命奥秘、认识自我的漫漫长路上又迈出了重要的一步。同
时也提出了新的挑战。科学家将对人类基因组进行更加深入的研究，一方面寻找不同人群之间的基因差异，一方面破译不同基因的功能，以取得更多的数据，为人类战胜疾病、提高生命质量提供更多的参考。因
此构建人类遗传物质质粒文库势在必行。人类遗传物质质粒文库的构建将为开展重大疾病、重要生理功能相关功能基因、中华民族单核苷酸多态性的开发应用提供丰富的资源。为了合理有效保存、开发、利用人类遗传资源，结
合实际工作要求，特制定人类遗传物质质粒文库建立规程。
人类遗传物质质粒文库建立规程不同于一般遗传物质的保存规程，需要多种遗传资源的整合。提取人类遗传物质，涉
及人类基因组
DNA
、
RNA
及特异染色体的基因文库构建。本规程包括人类基因组
DNA
文库的建立、
cDNA
文库的建立、人类特异染色体基因文库建立等技术流程。
目
录
1
范 围
2
规范性引用文件
3
术语和定义
4
实验室设置和设备
5
人类基因组
DNA
文库构建
5.1
分离基因组
DNA
（
gDNA
）
5.2
载体选择
5.3
基因组
DNA
文库的构建流程：应用黏粒载体构建基因组
DNA
文库
6
人类
cDNA
文库构建
6.1
总
RNA
（
Total RNA
）的提取：
TRIzol
试剂提取总
RNA
6.2 mRNA
的分离
6.3 cDNA
的甲基化
6.4
接头或衔接子的连接
6.5 Sepharose CL-4B
凝胶过滤法分离
cDNA
6.6 cDNA
与λ噬菌体臂的连接
6.7 cDNA
与质粒载体连接
7
染色体特异基因文库构建
7.1
中期染色体显微切割标本的制备
7.2
染色体显微切割、
PCR
及探针池的制备
7.3 DNA
微抽提及连接
7.4
染色体免疫荧光原位杂交
附录
A
利用
P1
载体建立基因组文库
附录
B
利用
BAC
载体构建基因组文库
附录
C
利用
YAC
克隆载体建立基因组文库
附录
D
菌落的裂解及
DNA
杂交
附录
E
通过杂交筛选未扩增的粘粒文库方法
附录
F
电转化流程
参考文献